Ion Besoiu s-a născut pe 11 martie 1931, la Sibiu. A debutat în 1957, dar consacrarea a venit abia după lansarea serialului „Toate pânzele sus”, în regia lui Mircea Mureşan, în care i-a avut ca parteneri pe actorii Ilarion Ciobanu şi Jean Constantin. Timp de 16 ani, a jucat pe scena Teatrului „Radu Stanca” din Sibiu, după care s-a mutat la Bucureşti, unde a jucat la Teatrul Bulandra şi a fost, ulterior, timp de 12 ani, directorul acestei instituţii.
Cele mai cunoscute roluri ale sale sunt Cloşca, în „Procesul lui Horia” (1967), Serebreakov, în „Unchiul Vanea” (1983), Polonius, în „Hamlet” (1985), Oronte, în „Mizantropul”(1989), Corifeu, în „Antigona” (1993), Ferapont, în „Trei surori” (1995), Senecus, în „Caligula” (1996), şi Muhoiarov Ivan Matveevici, în „Oblomov” (2003). Printre filmele în care a jucat Ion Besoiu se numără „Furtuna”, „Neamul Şoimăreştilor”, „Haiducii”, „Răscoala”, „Mihai Viteazul”, „Ciprian Porumbescu”, „Păcală”, „Ion, blestemul pământului, blestemul iubirii”, „Ultima noapte de dragoste”, „Lumini şi umbre”.
În anul 2001, Ion Besoiu a fost declarat cetăţean de onoare al oraşului Sibiu, în care s-a născut.
Anl trecut, la împlinirea vârstei de 85 de ani, Ion Besoiu afirma că a avut o serie de probleme de sănătate care l-au determinat să îşi pună un stimulator cardiac. Avea însă şi un mare regret ”Am regretul că nu mai trăiesc încă vreo 25 de ani asta e tot şi am păreri de rău că am pierdut pe foarte mulţi oameni dragi, nu ştiu daca i-am pierdut, poate ca acolo unde sunt ei acum e mai bine,” potrivit stirileprotv.ro
Ion Besoiu a primit mai multe distincţii, printre care şi premiul Uniunii Teatrale din România (UNITER) pentru întreaga carieră, în 2008, dar şi premiul Gopo pentru întreaga carieră, anul acesta.